上海市實時熒光定量PCR儀研發(fā)
發(fā)布時間：2023-09-02 01:26:26
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熱啟動Taq酶產(chǎn)品優(yōu)勢;1. 靈敏度高：可直接擴增1個拷貝的支原體DNA。2. 化學修飾，無動物性DNA污染。3. 性價比高：相對市面上zui常用的熱啟動聚合酶性價比更高。4. 擴增效率高：熒光定量PCR起峰快，Ct值低，擴增效率高。5. 可重復性高：熒光定量PCR擴增曲線重合度高，受干擾影響少。熱啟動Taq酶應用：1. 熱啟動PCR 2. 熒光定量PCR 3. DNA序列測定4. TA cloning.
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動物檢疫的分類:根據(jù)我國現(xiàn)行的動物檢疫法律規(guī)定，我國動物檢疫分為進出境檢疫和國內.檢疫兩大類。①進出境動物檢疫。是指對進出我國國境的動物、動物產(chǎn)品，由口岸動植物檢疫機關實施的檢疫。具體分為:進境動物、動物產(chǎn)品檢疫;出境動物、動物產(chǎn)品檢疫;過境動物、動物產(chǎn)品檢疫;②國內檢疫。指對國內流動的動物、動物產(chǎn)品所進行的檢疫。具體劃分為:產(chǎn)地檢疫、屠宰檢疫、動物產(chǎn)品檢疫。
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常規(guī)普通PCR常見問題：1. 優(yōu)化反應條件，梯度摸索退火溫度，延長退火延伸時間，增加反應循環(huán)數(shù)（30-45區(qū)間為宜）。2. 對核酸模板進行純化，或使用商業(yè)化核酸提取試劑盒進行提取，增加核酸模板的上樣量。3. 優(yōu)化反應體系（預混體系除外），改變檢測體系中的Mg2+濃度及dNTPs用量，更換體系中Buffer。4. 重新設計引物，避免引物二聚體和鏈內二級結構，在一次稀釋引物后可分裝成多支小管，減少反復凍融次數(shù)。
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分子診斷的主要技術有核酸分子雜交、聚合酶鏈反應和生物芯片技術。1.核酸分子雜交技術 具有一定互補序列和核苷酸單鏈在液相或固相中按堿基互補配對原則締合成異質雙鏈的過程，稱為核酸分子雜交。雜交的雙方是待測核酸序列和探針序列。應用該技術可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測。2.聚合酶鏈反應（即Polymerase chain reaction，PCR）原理：PCR是模板DNA，引物和四種脫氧核糖核昔三磷酸（dNTP）在DNA聚合酶作用下發(fā)生酶促聚合反應，擴增出所需目的DNA。包括三個基本步驟：雙鏈DNA模板加熱變性成單鏈（變性）；在低溫下引物與單鏈DNA互補配對（退火）；在適宜溫度下TapDNA聚合酶催化引物沿著模板DNA延伸。3.生物芯片技術是近年發(fā)展起來的分子生物學與微電子技術相結合的核酸分析檢測技術。起初的生物芯片技術主要目標是用于DNA序列測定、基因表達譜鑒定和基因突變體檢測和分析，所以又稱為DNA芯片或基因芯片技術。由于這一技術已擴展至免疫反應、受體結合等非核酸領域，出現(xiàn)了蛋白質芯片、免疫芯片、細胞芯片、組織芯片等，所以改稱生物芯片技術更符合發(fā)展趨勢。
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全球，雖然只有少數(shù)的芯片可用于臨床診斷，但國內基因芯片技術已經(jīng)處于世界領 跑的地位?；蛐酒夹g將是熒光定量PCR 檢測技術具挑戰(zhàn)的潛在對手，主要是：熒光定量PCR 技術一次只能檢測一個或幾個目標基因，而基因芯片技術可以實現(xiàn)對大量目標基因的同時檢測。隨著人類基因組計劃的進展，基因芯片在國內外已成為研發(fā)熱點。若基因芯片技術迅速成熟并大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化，將對熒光定量PCR 檢測產(chǎn)生較大的沖擊。不過，基因芯片的大規(guī)模臨床應用還存在尚未克服的技術缺陷，主要是由于芯片診斷特異性和靈敏度低、芯片診斷成本高昂和芯片診斷配套儀器價格昂貴等原因，預計熒光定量PCR 檢測技術在今后5 到10 年內可保持前鋒。
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PCR產(chǎn)品占據(jù)分子診斷的主要市場，基因芯片是分子診斷市場發(fā)展的主要趨勢。PCR產(chǎn)品靈敏度高、特異性強、診斷窗口期短，可進行定性、定量檢測，可廣泛用于肝炎、性病、肺感染性疾病、優(yōu)生優(yōu)育、遺傳病基因、腫瘤等，填補了早期免疫檢測窗口期的檢測空白，為早期診斷、早期治療、安 全用血提供了有效的幫助。基因芯片是分子生物學、微電子、計算機等多學科結合的結晶，綜合了多種現(xiàn)代高精尖技術，被專家譽為診斷行業(yè)產(chǎn)品。但其成本高、開發(fā)難度大，產(chǎn)品種類很少，只用于科研和藥物篩選等用途。